ใช้เป็นสารกลางเมแทบอลิซึมสำคัญในงานวิจัยทางชีวเคมี โดยเฉพาะในการศึกษากระบวนการ glycolysis และ gluconeogenesis. เป็น substrate สำหรับเอนไซม์ เช่น pyruvate kinase และ phosphoenolpyruvate carboxylase ทำให้มีคุณค่าในการทดสอบเอนไซม์และการวิเคราะห์เส้นทางเมแทบอลิซึม. ใช้บ่อยในระบบ cell-free เพื่อศึกษาการถ่ายโอนพลังงานและกระบวนการ phosphorylation. นอกจากนี้ยังใช้ในการพัฒนาและปรับปรุงชุดตรวจวินิจฉัยสำหรับการวัดกิจกรรมเอนไซม์. รูปแบบ trisodium salt hydrate ช่วยเพิ่ม solubility และ stability ในสารละลายน้ำ เหมาะสำหรับการใช้งาน in vitro.