เมทิลไวโอเลต 2B ถูกนำมาใช้อย่างแพร่หลายในอุตสาหกรรมสิ่งทอเป็นสีย้อมสำหรับผ้า โดยเฉพาะฝ้าย ผ้าไหม และกระดาษ นอกจากนี้ยังใช้ในการย้อมสีทางชีววิทยาเพื่อแยกประเภทเซลล์ภายใต้กล้องจุลทรรศน์ โดยเฉพาะใน Gram staining เพื่อระบุแบคทีเรีย ในอุตสาหกรรมการพิมพ์ ใช้เป็นสารให้สีสำหรับหมึกและโทนเนอร์ รวมถึงการผลิตปากกาและมาร์กเกอร์บางประเภท

ในด้านเคมีวิเคราะห์ เมทิลไวโอเลต 2B ใช้เป็นตัวบ่งชี้ pH ซึ่งเปลี่ยนสีตามระดับความเป็นกรดด่าง นอกจากนี้ ยังมีการประยุกต์ใช้ในงานวิจัยทางวิทยาศาสตร์ และมีคุณสมบัติต้านจุลินทรีย์ จึงใช้ในสารฆ่าเชื้อและยาฆ่าเชื้อบางชนิดสำหรับรักษาการติดเชื้อผิวหนังเล็กน้อย