HEPES บัฟเฟอร์มักใช้ในการวิจัยทางชีววิทยาและชีวเคมีเพื่อรักษาค่าความเป็นกรด-เบส (pH) ให้คงที่ในสารละลาย โดยเฉพาะในสภาพแวดล้อมที่ต้องควบคุมค่า pH อย่างเคร่งครัด เช่น ในการเพาะเลี้ยงเซลล์ เนื่องจาก HEPES มีความเสถียรและไม่ทำปฏิกิริยากับสารอื่นๆ ในสารละลายได้ง่าย นอกจากนี้ยังใช้ในกระบวนการแยกและวิเคราะห์โปรตีน รวมถึงการทดสอบทางเอนไซม์ เพราะไม่รบกวนการทำงานของเอนไซม์หรือโปรตีน HEPES ยังนิยมใช้ในเทคนิคทางชีววิทยาโมเลกุล เช่น การทดสอบ PCR และการวิเคราะห์ทางไฟฟ้าเคมี เนื่องจากช่วยป้องกันการเปลี่ยนแปลงของ pH ที่อาจเกิดขึ้นระหว่างการทดลอง