HEPES Buffer ใช้เป็นสารบัฟเฟอร์ในงานวิจัยทางชีววิทยาและชีวเคมี เนื่องจากมีความเสถียรในช่วง pH 6.8-8.2 ซึ่งเหมาะสมสำหรับการทดลองที่เกี่ยวข้องกับเซลล์และเอนไซม์ มักใช้ในกระบวนการเพาะเลี้ยงเซลล์ เพื่อรักษาสภาวะ pH ให้คงที่แม้ในสภาวะที่มีการเปลี่ยนแปลงของ CO2 นอกจากนี้ยังใช้ในเทคนิคทางชีววิทยาโมเลกุล เช่น การแยกและวิเคราะห์โปรตีน การศึกษา DNA และ RNA รวมถึงการทดสอบทางเภสัชวิทยา HEPES Buffer ช่วยลดการเกิดสารพิษที่อาจเกิดขึ้นจากสารบัฟเฟอร์ชนิดอื่น ทำให้เป็นที่นิยมในงานวิจัยที่ต้องใช้ความแม่นยำสูง