ดี-ไบโอทินถูกใช้เป็นส่วนประกอบสำคัญในผลิตภัณฑ์เสริมอาหารเพื่อสุขภาพเส้นผม ผิวหนัง และเล็บ โดยช่วยเสริมความแข็งแรงของเส้นผมและลดการหลุดร่วง นอกจากนี้ยังมีบทบาทในการทำงานของเอนไซม์ที่เกี่ยวข้องกับการเผาผลาญคาร์โบไฮเดรต โปรตีน และไขมัน ทำให้ร่างกายสามารถผลิตพลังงานได้อย่างมีประสิทธิภาพ ไบโอทินยังใช้ในห้องปฏิบัติการทางชีววิทยาเพื่อการติดฉลากโปรตีนหรือกรดนิวคลีอิก เนื่องจากสามารถจับกับสารสเตรปทาวิดินได้อย่างแน่นหนา ซึ่งเหมาะสำหรับการตรวจวัดด้วยเทคนิคต่างๆ เช่น ELISA หรือการตรวจหาสารชีวโมเลกุลในเซลล์