โรดามีน บี เป็นสีย้อมเรืองแสงที่ใช้กันอย่างแพร่หลายในงานวิจัยทางชีววิทยาและการประยุกต์ใช้ในอุตสาหกรรมต่างๆ ในงานวิจัยทางชีววิทยา ใช้สำหรับย้อมเซลล์และเนื้อเยื่อเพื่อศึกษาโครงสร้างและกระบวนการของเซลล์ภายใต้กล้องจุลทรรศน์เรืองแสง นอกจากนี้ ยังใช้ใน flow cytometry เพื่อตรวจจับและวิเคราะห์ประชากรเซลล์เฉพาะ ในอุตสาหกรรมสิ่งทอ โรดามีน บี ใช้เป็นสารย้อมสีสำหรับผ้า เพื่อให้สีสันสดใส นอกจากนี้ ยังใช้ในการผลิตหมึก สีทา และสารเคลือบ เพื่อให้ได้สีสันสดใสและคงทน ในงานศึกษาสิ่งแวดล้อม ใช้เป็นสีย้อมติดตามเพื่อตรวจสอบการไหลของน้ำและตรวจหาการรั่วไหลในระบบประปา คุณสมบัติการเรืองแสงที่แรงทำให้มีคุณค่าในเทคโนโลยีเลเซอร์สำหรับการปรับแต่งและสอบเทียบ