3β-Hydroxy-Δ5-cholenic Acid ใช้หลักในการวิจัยทางชีวเคมี โดยเฉพาะการศึกษาเกี่ยวกับการเผาผลาญกรดน้ำดีและการทำงานของตับ สารนี้ทำหน้าที่เป็นสารกลางสำคัญในการสังเคราะห์ชีวภาพของกรดน้ำดี ซึ่งจำเป็นสำหรับการย่อยและการดูดซึมไขมันและวิตามินที่ละลายในไขมันในลำไส้ นักวิจัยมักใช้สารนี้เพื่อตรวจสอบเส้นทางและเอนไซม์ที่เกี่ยวข้องกับการสังเคราะห์กรดน้ำดี รวมถึงการศึกษาความผิดปกติที่เกี่ยวข้องกับการเผาผลาญกรดน้ำดี เช่น โรคคอเลสตาซิสและโรคตับบางชนิด นอกจากนี้ ยังใช้ในการพัฒนาเครื่องมือวินิจฉัยและยารักษาที่มุ่งเป้าไปยังภาวะที่เกี่ยวข้องกับกรดน้ำดี บทบาทของมันในการทำความเข้าใจการควบคุมระดับคอเลสเตอรอลและการเผาผลาญลิพิดยังทำให้มีคุณค่าในการวิจัยโรคหัวใจและหลอดเลือด