4-Pyridoxolactone ใช้หลักในการวิจัยทางชีวเคมีเป็นสารตั้งต้นในการสังเคราะห์ pyridoxine (วิตามินบี6) และอนุพันธ์ของมัน มีบทบาทในการศึกษากลไกการเผาผลาญ โดยเฉพาะที่เกี่ยวข้องกับวิตามินบี6 ซึ่งจำเป็นสำหรับการเผาผลาญกรดอะมิโน การสังเคราะห์สารสื่อประสาท และการผลิตฮีโมโกลบิน นอกจากนี้ ยังใช้ในการพัฒนายาเภสัชภัณฑ์ที่เล็งเป้าไปยังเอนไซม์ที่ขึ้นกับวิตามินบี6 การประยุกต์ใช้ขยายไปถึงการตรวจสอบตัวแทนบำบัดที่อาจใช้รักษาโรค เช่น โรคลมชัก ภาวะโลหิตจาง และความผิดปกติทางความรู้ความเข้าใจ ในสภาพแวดล้อมอุตสาหกรรม อาจใช้เป็นสารกลางในการผลิตอาหารเสริมโภชนาการและอาหารเสริมวิตามิน