สารนี้ถูกใช้เป็นสารตั้งต้นในการศึกษาปฏิกิริยาเอนไซม์ โดยเฉพาะอย่างยิ่งในกระบวนการไฮโดรไลซิสของเปปไทด์ เนื่องจากมีกลุ่ม 4-nitroanilide ที่สามารถปลดปล่อยสารสีเหลืองเมื่อถูกย่อยสลาย ทำให้สามารถติดตามและวัดผลการทำงานของเอนไซม์ได้อย่างง่ายดายด้วยวิธีสเปกโตรโฟโตเมทรี นอกจากนี้ยังใช้ในการวิจัยทางชีวเคมีเพื่อศึกษากลไกการทำงานของเอนไซม์โปรตีเอส ซึ่งเกี่ยวข้องกับกระบวนการทางชีวภาพหลายอย่าง เช่น การย่อยโปรตีนและการส่งสัญญาณภายในเซลล์