ฟลูออเรสเซอิน ไดอะซีเตท ถูกใช้อย่างแพร่หลายในการวิจัยทางชีววิทยาและการแพทย์ในฐานะสีย้อมสำคัญเพื่อประเมินความมีชีวิตของเซลล์ มีประสิทธิภาพโดยเฉพาะในกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนส์ ซึ่งช่วยแยกแยะระหว่างเซลล์ที่มีชีวิตและเซลล์ที่ตาย เมื่อนำเข้าสู่เซลล์ที่มีชีวิต สารประกอบที่ไม่เรืองแสงนี้จะถูกไฮโดรไลซ์โดยเอสเทอเรสภายในเซลล์ สร้างฟลูออเรสเซอิน ซึ่งปล่อยแสงฟลูออเรสเซนส์สีเขียวภายใต้แสง UV คุณสมบัตินี้ทำให้เป็นเครื่องมือที่มีค่าในการทดสอบไซโททอกซิซิตี การศึกษาการเพิ่มจำนวนเซลล์ และการตรวจสอบสิ่งแวดล้อมสำหรับกิจกรรมจุลินทรีย์ นอกจากนี้ ยังใช้ในจักษุวิทยาสำหรับวัตถุประสงค์วินิจฉัย เช่น การประเมินความสมบูรณ์ของเยื่อบุกระจกและการตรวจจับการบาดเจ็บที่ตา การประยุกต์ใช้ขยายไปถึงการไหลของเซลล์ (flow cytometry) ซึ่งช่วยในการวิเคราะห์ประชากรเซลล์ตามกิจกรรมเมแทบอลิซึมของพวกมัน