ใช้ในงานวิจัยด้านชีวเคมีและเภสัชกรรมเป็นหลัก โดยเฉพาะในการพัฒนายาต้านมะเร็ง เนื่องจากมีโครงสร้างที่คล้ายกับโฟลิกแอซิด ซึ่งสามารถยับยั้งการทำงานของเอนไซม์ดีไฮโดรโฟเลตเรดักเทส (DHFR) ได้ ทำให้รบกวนการสังเคราะห์ดีเอ็นเอและอาร์เอ็นเอในเซลล์มะเร็ง ส่งผลให้การแบ่งตัวของเซลล์มะเร็งชะลอลง นิยมใช้เป็นสารตั้งต้นหรือสารกลางในการสังเคราะห์สารประกอบที่มีฤทธิ์ต้านการเจริญเติบโตของเซลล์มะเร็ง โดยเฉพาะในมะเร็งบางประเภทที่มีการแพร่กระจายเร็ว เช่น มะเร็งเม็ดเลือดขาว และมะเร็งเต้านม นอกจากนี้ยังใช้เป็นเครื่องมือในการศึกษาโมเดลการทำงานของยาที่ออกฤทธิ์ผ่านระบบเมแทบอลิซึมของโฟลิกแอซิดในห้องปฏิบัติการ ช่วยให้นักวิจัยเข้าใจกลไกการดื้อยา และพัฒนายาใหม่ที่มีประสิทธิภาพมากขึ้น