แคลเซียมลิวโฟลิเนตใช้เป็นยาต้านพิษจากเมโทรเทรกเซต โดยเฉพาะในผู้ป่วยที่ได้รับเมโทรเทรกเซตในขนาดสูง เช่น ในการรักษาโรคมะเร็ง ตัวยานี้ช่วยลดพิษต่อไขกระดูกและเยื่อบุต่างๆ ที่เกิดจากเมโทรเทรกเซตได้อย่างมีประสิทธิภาพ นอกจากนี้ยังใช้ร่วมกับยาฟลูออโรยูราซิล (5-FU) ในการรักษาโรคมะเร็งลำไส้ใหญ่และทวารหนัก เพราะช่วยเพิ่มประสิทธิภาพของ 5-FU ในการยับยั้งการเจริญเติบโตของเซลล์มะเร็ง ทำให้การรักษามีผลดีขึ้น