อะมิลไนไตรท์ถูกใช้ในทางการแพทย์เป็นหลักในฐานะยาขยายหลอดเลือด โดยใช้รักษาโรคหัวใจ เช่น แองจิน่าเพคทอริส โดยการผ่อนคลายและขยายหลอดเลือด ซึ่งช่วยเพิ่มการไหลเวียนเลือดและลดภาระงานของหัวใจ มักสูดดมเพื่อบรรเทาอาการอย่างรวดเร็วในระหว่างอาการกำเริบเฉียบพลัน นอกจากนี้ อะมิลไนไตรท์ยังถูกใช้ในขั้นตอนการวินิจฉัยเพื่อประเมินเสียงหัวใจโดยการเปลี่ยนแปลงรูปแบบการไหลเวียนเลือดชั่วคราว นอกเหนือจากการใช้งานทางการแพทย์ บางครั้งถูกใช้ในทางนันทนาการเพื่อสร้างความรู้สึกเคลิบเคลิ้มและผ่อนคลาย แม้ว่าจะผิดกฎหมายและก่อให้เกิดความเสี่ยงต่อสุขภาพอย่างรุนแรง ในสถานที่อุตสาหกรรม มันทำหน้าที่เป็นสารเคมีในกระบวนการสังเคราะห์ โดยเฉพาะในการผลิตสารประกอบอินทรีย์อื่นๆ