ใช้ในงานวิจัยด้านเภสัชวิทยาเพื่อศึกษาการเปลี่ยนแปลงของนิโคตินในร่างกาย โดยเฉพาะกระบวนการเมแทบอลิซึมของนิโคตินในตับ ซึ่งสารนี้เป็นเมแทบอลิทหลักที่เกิดจากการออกซิเดชันของนิโคติน ช่วยให้เข้าใจกลไกการดูดซึม การกระจายตัว และการขับออกของสารออกฤทธิ์ในบุหรี่และผลิตภัณฑ์ยาสูบอื่น ๆ นอกจากนี้ยังใช้เป็นมาตรฐานในการวิเคราะห์สารตกค้างของนิโคตินในตัวอย่างชีวภาพ เช่น เลือด ปัสสาวะ หรือน้ำลาย ในการศึกษาการสัมผัสสารนิโคตินทั้งในผู้สูบบุหรี่และผู้ที่ได้รับควันบุหรี่มือสอง