DNA Ligase จาก T4-infected Escherichia coli ถูกนำมาใช้อย่างแพร่หลายในชีววิทยาโมเลกุลสำหรับการเชื่อมต่อชิ้นส่วน DNA มันมีบทบาทสำคัญในการทดลองโคลนโดยการปิดรอยแตกในโครงสร้าง DNA เพื่อให้มั่นใจในความสมบูรณ์ของโมเลกุล DNA ที่เกิดจากการรวมพันธุ์เอนไซม์นี้จำเป็นสำหรับการสร้างพลาสมิด โดยการเชื่อมต่อ DNA ที่แทรกเข้าไปกับ DNA เวกเตอร์ ทำให้สามารถจำลอง DNA ที่รวมพันธุ์ในเซลล์โฮสต์ได้ นอกจากนี้ยังใช้ในการศึกษาการซ่อมแซม DNA เพื่อทำความเข้าใจและเลียนแบบกลไกการซ่อมแซม DNA ตามธรรมชาติ T4 DNA Ligase ยังถูกนำมาใช้ในการเตรียมไลบรารีสำหรับการจัดลำดับรุ่นใหม่ (NGS) โดยการเชื่อมต่ออะแดปเตอร์กับชิ้นส่วน DNA สำหรับการจัดลำดับ ความมีประสิทธิภาพและความน่าเชื่อถือสูงทำให้เป็นเครื่องมือหลักในวิศวกรรมพันธุกรรม ชีววิทยาสังเคราะห์ และการประยุกต์ใช้ทางเทคโนโลยีชีวภาพต่างๆ