เอสคูลิน เซสควิไฮเดรตถูกนำมาใช้หลักในห้องปฏิบัติการเป็นตัวบ่งชี้เรืองแสง มักใช้ในฮิสโตโลยีและไซโทโลยีเพื่อย้อมและแสดงภาพเนื้อเยื่อทางชีวภาพภายใต้กล้องจุลทรรศน์ โดยเฉพาะในการศึกษาระบบหลอดเลือดและระบบน้ำเหลือง ความสามารถในการเรืองแสงใต้แสงอัลตราไวโอเลตทำให้มีคุณค่าต่อการติดตามและระบุโครงสร้างเฉพาะในตัวอย่างเซลล์และเนื้อเยื่อ นอกจากนี้ เอสคูลิน เซสควิไฮเดรตยังถูกใช้ในจุลชีววิทยาเป็นส่วนประกอบของอาหารเลี้ยงเชื้อเลือกสรรเพื่อแยกแยะสายพันธุ์แบคทีเรียบางชนิด เช่น Enterococcus โดยอิงจากความสามารถในการไฮโดรไลซ์เอสคูลินด้วยเอนไซม์ β-glucosidase

การประยุกต์ใช้ขยายไปสู่การวิจัยทางเภสัชวิทยา ซึ่งศึกษาถึงศักยภาพในการเป็นสารต้านอนุมูลอิสระและต้านการอักเสบ