4-Nitrophenyl β-D-Glucuronide ใช้เป็นสารตั้งต้นในงานทดสอบเอนไซม์เพื่อวัดกิจกรรมของ β-glucuronidase เมื่อเอนไซม์ทำการไฮโดรไลซิส จะปลดปล่อย 4-nitrophenol ซึ่งให้สีเหลืองที่ตรวจจับได้ด้วยสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ (โดยทั่วไปที่ 405 nm) ทำให้สามารถวัดปริมาณกิจกรรมเอนไซม์ได้อย่างแม่นยำ สิ่งนี้มีความสำคัญในงานวิจัยทางชีวเคมี การวินิจฉัยทางคลินิก และการพัฒนาเภสัชภัณฑ์ ช่วยในการตรวจหกิจกรรมเอนไซม์ในตัวอย่างชีวภาพ การศึกษากิเนติกส์ของเอนไซม์ และการคัดกรองสารยับยั้ง นอกจากนี้ ยังใช้ในชุดตรวจวินิจฉัยสำหรับการปนเปื้อนของแบคทีเรีย เนื่องจาก β-glucuronidase เป็นตัวบ่งชี้สำหรับแบคทีเรียบางชนิด เช่น E. coli ในงานวิจัยเภสัชวิทยา ใช้ในการประเมินการเมแทบอลิซึมของยา โดยเฉพาะกระบวนการ glucuronidation