โฟลินิกแอซิดถูกใช้อย่างแพร่หลายในการรักษาทางการแพทย์ โดยเฉพาะอย่างยิ่งในฐานะยาแก้พิษเพื่อต่อต้านผลกระทบพิษของเมโทเทรกเซต ซึ่งเป็นยาเคมีบำบัด โดยช่วยปกป้องเซลล์สุขภาพดี ในขณะที่ยังคงให้เมโทเทรกเซตสามารถเล็งเป้าไปที่เซลล์มะเร็งได้อย่างมีประสิทธิภาพ นอกจากนี้ ยังใช้ในการรักษาภาวะขาดโฟเลต ซึ่งอาจนำไปสู่ภาวะโลหิตจางและปัญหาสุขภาพอื่นๆ เมื่อใช้ร่วมกับฟลูออราชิล (5-FU) จะช่วยเพิ่มประสิทธิภาพของการรักษาเคมีบำบัดสำหรับมะเร็งลำไส้ใหญ่ โฟลินิกแอซิดยังถูกนำมาใช้ในการลดผลข้างเคียงของยาบางชนิดที่รบกวนการเผาผลาญโฟเลต นอกเหนือจากด้านมะเร็งวิทยา มันยังมีบทบาทในการสนับสนุนสุขภาพทางระบบประสาท และบางครั้งใช้ในการรักษาภาวะขาดโฟเลตในสมอง ความสามารถในการทำหน้าที่เป็นแหล่งโฟเลตทำให้มีคุณค่าในแอปพลิเคชันการรักษาและการดูแลสนับสนุนต่างๆ นอกจากนี้ ยังใช้ในการบำบัดพิษจากสารบางชนิด เช่น เมทานอล