ใช้ในงานทดสอบเอนไซม์เพื่อตรวจจับกิจกรรมของโปรตีเอส โดยเฉพาะโปรตีเอสเซรีน เช่น trypsin และ thrombin สารนี้ทำหน้าที่เป็นซับสเตรตโครโมเจนิก—เมื่อถูกตัดโดยเอนไซม์เป้าหมาย จะปลดปล่อย p-nitroaniline (pNA) ซึ่งเป็นผลิตภัณฑ์สีเหลืองที่สามารถวัดได้ด้วยสเปกโตรโฟโตเมตรีที่ 405 nm ทำให้สามารถตรวจสอบจลนศาสตร์ของเอนไซม์และการศึกษาการยับยั้งแบบเรียลไทม์ นิยมใช้ใน high-throughput screening การพัฒนายา และงานวิจัยชีวเคมีเพื่อประเมินการทำงานและความจำเพาะของเอนไซม์ กลุ่ม p-tosyl ช่วยเพิ่มความเลือกสรรของซับสเตรตสำหรับโปรตีเอสบางชนิด ทำให้เป็นเครื่องมือที่มีคุณค่าในงานวินิจฉัยและวิเคราะห์