7-hydroxy Methotrexate ใช้หลักๆ ในงานวิจัยทางการแพทย์และสถานพยาบาลเพื่อศึกษาการเมแทบอลิซึมและเภสัชจลนศาสตร์ของ methotrexate ซึ่งเป็นยาเคมีบำบัดและยาแก้ภูมิแพ้ที่ใช้กันอย่างแพร่หลาย สารนี้ทำหน้าที่เป็นเมแทบอไลต์หลักในการทำความเข้าใจกระบวนการที่ methotrexate ถูกประมวลผลในร่างกาย โดยเฉพาะในผู้ป่วยที่กำลังรับการรักษาโรคมะเร็ง เช่น มะเร็งเม็ดเลือดขาว มะเร็งต่อมน้ำเหลือง และโรคภูมิต้านทานตัวเองบางชนิด เช่น โรคข้ออักเสบรูมาตอยด์ การตรวจวัดระดับของสารนี้ช่วยประเมินการตอบสนองของผู้ป่วย ปรับขนาดยาให้เหมาะสม และลดความเป็นพิษ นอกจากนี้ยังมีบทบาทในการพัฒนาวิธีวิเคราะห์สำหรับการตรวจติดตามยา และในการศึกษาการโต้ตอบของยาและกลไกการดื้อยาในบำบัดมะเร็ง