โคเอนไซม์ B12 ถูกนำมาใช้ในหลายด้านทางชีววิทยาและทางการแพทย์ เนื่องจากมีบทบาทสำคัญในกระบวนการเมแทบอลิซึมของเซลล์ โดยเฉพาะอย่างยิ่งในปฏิกิริยาที่เกี่ยวข้องกับการถ่ายโอนกลุ่มเมทิลและการสังเคราะห์ DNA ในทางการแพทย์ ใช้เพื่อรักษาภาวะขาดวิตามิน B12 ซึ่งอาจนำไปสู่โรคโลหิตจางและความผิดปกติของระบบประสาท นอกจากนี้ ยังมีการใช้ในกระบวนการทางอุตสาหกรรม เช่น การผลิตสารเคมีเฉพาะทางและในเทคโนโลยีชีวภาพเพื่อปรับปรุงประสิทธิภาพของปฏิกิริยาเอนไซม์