L-Alanine 4-nitroanilide hydrochloride ใช้เป็นสารตั้งต้นในงานวิจัยทางชีวเคมี โดยเฉพาะในการศึกษากิจกรรมของเอนไซม์โปรตีเอสและเปปติเดส ซึ่งเป็นเอนไซม์ที่เกี่ยวข้องกับการย่อยโปรตีน สารนี้ทำหน้าที่เป็น chromogenic substrate ช่วยในการตรวจจับและวัดปริมาณกิจกรรมของเอนไซม์ผ่านการทดสอบ colorimetric เมื่อเอนไซม์ตัดสารนี้ จะปลดปล่อย 4-nitroaniline ซึ่งให้สีเหลืองที่สามารถวัดได้ด้วยสเปกโทรโฟโตเมทรี ทำให้เป็นเครื่องมือที่มีคุณค่าในการศึกษาจลนศาสตร์ของเอนไซม์ การยับยั้ง และความจำเพาะ นอกจากนี้ ยังใช้ในงานวินิจฉัยเพื่อประเมินการทำงานของเอนไซม์ในสถานพยาบาลและห้องปฏิบัติการ