ใช้เป็นสารโครโมเจนิกซับสเตรตในงานทดสอบเอนไซม์เพื่อตรวจจับและวัดปริมาณกิจกรรมของ α-glucosidase เมื่อถูกไฮโดรไลซ์โดย α-glucosidase จะปล่อย 4-nitrophenol ซึ่งมีสีเหลืองและสามารถวัดได้ด้วยสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ที่ความยาวคลื่นประมาณ 400–410 nm ทำให้มีคุณค่าในห้องปฏิบัติการชีวเคมีและคลินิกสำหรับศึกษากิเนติกส์ของเอนไซม์ การคัดกรองตัวยับยั้ง และวินิจฉัยการขาดเอนไซม์ นอกจากนี้ยังใช้ในจุลชีววิทยาเพื่อระบุสายพันธุ์แบคทีเรียบางชนิดตามความสามารถในการไฮโดรไลซ์สารนี้ โดยเฉพาะในงานวิจัยที่เกี่ยวข้องกับการยับยั้งเอนไซม์ซึ่งมีความสำคัญต่อการพัฒนายาสำหรับรักษาโรคเบาหวาน ใช้กันทั่วไปในงานวิจัยที่เกี่ยวข้องกับการเมแทบอลิซึมของคาร์โบไฮเดรตและในการพัฒนาชุดทดสอบวินิจฉัย