ใช้เป็นสารตั้งรับโครโมเจนิกในงานทดสอบเอนไซม์ โดยเฉพาะสำหรับตรวจจับกิจกรรมของเอสเทอเรสและไลเปส เมื่อถูกไฮโดรไลซิสโดยเอนไซม์ จะปล่อย 4-ไนโตรฟีนอล ซึ่งสร้างสีเหลืองที่ตรวจจับได้ที่ 400–410 นาโนเมตร ทำให้สามารถตรวจสอบกิจกรรมของเอนไซม์แบบเรียลไทม์ได้ กลุ่มไนโตรฟีนิลคู่ช่วยเพิ่มคุณสมบัติไฟฟ้าบวก ทำให้มีปฏิกิริยาสูงต่อการโจมตีนิวคลีโอฟิลิกโดยกรดอะมิโนเซรีนในไฮโดรเลส ใช้กันทั่วไปในระบบคัดกรองความเร็วสูง ชุดตรวจวินิจฉัย และการวิจัยทางชีวเคมีเพื่อวัดจลนศาสตร์ของเอนไซม์และการยับยั้ง ยังใช้ในการพัฒนาเซ็นเซอร์ชีวภาพและศึกษากลไกของเอนไซม์เนื่องจากผลตอบสนองทางสีที่ชัดเจน