คอเลสเตอรอลมีบทบาทสำคัญในร่างกายมนุษย์ โดยหลักแล้วเป็นส่วนประกอบโครงสร้างของเยื่อหุ้มเซลล์ ซึ่งช่วยรักษาความยืดหยุ่นและความสมบูรณ์ของเยื่อหุ้มเซลล์ นอกจากนี้ยังเป็นสารตั้งต้นในการสังเคราะห์โมเลกุลที่จำเป็น รวมถึงฮอร์โมนสเตียรอยด์ (เช่น คอร์ติซอล อัลโดสเตอโรน และฮอร์โมนเพศ) วิตามินดี และกรดน้ำดี ซึ่งช่วยในการย่อยไขมัน ในอุตสาหกรรมเภสัชกรรม คอเลสเตอรอลถูกใช้ในการเตรียมไลโปโซม ซึ่งเป็นระบบส่งยาที่ช่วยเพิ่มการส่งยาแบบกำหนดเป้าหมาย นอกจากนี้ยังถูกใช้ในห้องปฏิบัติการวิจัยเป็นมาตรฐานในการศึกษาทางชีวเคมีที่เกี่ยวข้องกับการเผาผลาญลิพิดและสุขภาพหัวใจและหลอดเลือด บทบาทของมันในการส่งสัญญาณของเซลล์และการจัดระเบียบเยื่อหุ้มเซลล์ทำให้เป็นจุดสนใจหลักในการศึกษโรคเช่น หลอดเลือดแข็งตัวและโรคที่เกี่ยวข้องกับลิพิดอื่นๆ