ใช้ในอุตสาหกรรมการผลิตวิตามินดี2 โดยการให้แสงอัลตราไวโอเลตแก่เออร์โกสเตอรอล ซึ่งจะเปลี่ยนโครงสร้างเป็นวิตามินดี2 ที่ใช้ในผลิตภัณฑ์เสริมอาหารและยาสำหรับเสริมสร้างกระดูกและฟัน นิยมใช้เป็นสารตั้งต้นในการผลิตสเตียรอยด์บางชนิดในห้องปฏิบัติการ เช่น คอร์ติโคสเตียรอยด์และฮอร์โมนเพศ เนื่องจากโครงสร้างคล้ายกับคอเลสเตอรอลในมนุษย์ ใช้เป็นตัวบ่งชี้ทางชีวภาพในการตรวจสอบเชื้อราในสิ่งแวดล้อมและตัวอย่างทางคลินิก เพราะเออร์โกสเตอรอลพบเฉพาะในเยื่อหุ้มเซลล์ของเชื้อรา ไม่พบในแบคทีเรียหรือเซลล์สัตว์ ในงานวิจัยด้านชีวเคมี ใช้ศึกษาคุณสมบัติของเยื่อหุ้มเซลล์และกลไกการทำงานของยาต้านเชื้อราที่ออกฤทธิ์ต่อเยื่อหุ้มเซลล์ เช่น โพลีน ที่จับกับเออร์โกสเตอรอลทำให้เยื่อหุ้มรั่ว