วิตามิน D2 มีการใช้งานหลักในด้านการเสริมสร้างสุขภาพกระดูกและฟัน โดยช่วยในการดูดซึมแคลเซียมและฟอสฟอรัสจากอาหาร ซึ่งเป็นแร่ธาตุสำคัญสำหรับการสร้างและบำรุงกระดูกให้แข็งแรง นอกจากนี้ยังใช้ในการป้องกันและรักษาโรคที่เกี่ยวข้องกับกระดูก เช่น โรคกระดูกอ่อนในเด็ก (Rickets) และโรคกระดูกพรุนในผู้ใหญ่ (Osteoporosis) วิตามิน D2 ยังมีบทบาทในการสนับสนุนระบบภูมิคุ้มกันของร่างกาย ช่วยลดการอักเสบ และอาจมีส่วนในการป้องกันโรคบางชนิด เช่น โรคหัวใจและหลอดเลือด โรคเบาหวาน และโรคมะเร็งบางประเภท ในทางการแพทย์ วิตามิน D2 มักถูกใช้เป็นส่วนหนึ่งของยาหรืออาหารเสริมสำหรับผู้ที่มีภาวะขาดวิตามิน D หรือผู้ที่ได้รับแสงแดดไม่เพียงพอ ซึ่งอาจส่งผลให้ร่างกายไม่สามารถสังเคราะห์วิตามิน D ได้เพียงพอตามธรรมชาติ นอกจากนี้ ยังมีการใช้วิตามิน D2 ในผลิตภัณฑ์เสริมอาหารสำหรับผู้ที่ต้องการเพิ่มระดับวิตามิน D ในร่างกาย โดยเฉพาะในกลุ่มผู้สูงอายุ ผู้ที่มีผิวคล้ำ หรือผู้ที่อาศัยในพื้นที่ที่มีแสงแดดน้อย