ใช้หลักๆ เป็นสารแอนตาโกนิสต์ของโฟเลตในการวิจัยทางการแพทย์และการรักษามะเร็ง สารประกอบนี้ทำหน้าที่เป็นตัวยับยั้งที่แรงของไดไฮโดรโฟเลตรีดักเทส (DHFR) ซึ่งเป็นเอนไซม์ที่สำคัญสำหรับการสังเคราะห์ดีเอ็นเอและการแบ่งตัวของเซลล์ ถูกใช้ในการศึกษากลไกการดื้อยาแอนติโฟเลต และทำหน้าที่เป็นสารตั้งต้นสำคัญในการพัฒนายาเคมีบำบัดแบบกำหนดเป้าหมาย

โครงสร้างของมันช่วยให้มีกิจกรรมเฉพาะเจาะจงต่อเซลล์ที่แบ่งตัวเร็ว ทำให้มีคุณค่าในการวิจัยมะเร็งวิทยา โดยเฉพาะในการออกแบบคอนจูเกตยาสำหรับการส่งยาเฉพาะที่เนื้องอก นอกจากนี้ ยังถูกสำรวจในการวิจัยโรคภูมิต้านตนเองเนื่องจากผลกระทบต่อการปรับภูมิคุ้มกัน