ใช้ในการรักษาโรคติดเชื้อแบคทีเรีย โดยเฉพาะอย่างยิ่งในการรักษาโรคหนองในเทียม (gonorrhea) ในผู้ที่แพ้ยาปฏิชีวนะชนิดเบต้า-แลคแทม เช่น เพนิซิลลิน หรือเซฟาโลสปอริน สเปกตินโอมัยซิน ได้รับการฉีดเข้ากล้ามเนื้อ และออกฤทธิ์โดยยับยั้งการสังเคราะห์โปรตีนของแบคทีเรีย ทำให้ยับยั้งการเจริญเติบโตของเชื้อ ส่วนใหญ่ใช้ในกรณีที่ไม่สามารถใช้ยาอื่นได้ หรือในผู้ป่วยที่มีความเสี่ยงต่อการแพ้ยาสูง นอกจากนี้ยังอาจใช้ในบางกรณีของการติดเชื้อในระบบทางเดินหายใจ โดยเฉพาะในผู้ป่วยที่มีภาวะดื้อต่อยาอื่นๆ