Sephadex G25 ถูกใช้อย่างแพร่หลายในการแยกและทำความสะอาดโปรตีน เปปไทด์ และโมเลกุลขนาดเล็กอื่นๆ จากสารละลายที่มีความเข้มข้นสูง เนื่องจากมีคุณสมบัติในการแยกตามขนาดโมเลกุล (Size Exclusion Chromatography) ทำให้สามารถแยกโมเลกุลขนาดใหญ่เช่นโปรตีนออกจากโมเลกุลขนาดเล็กเช่นเกลือหรือสารเติมแต่งได้อย่างมีประสิทธิภาพ นอกจากนี้ยังใช้ในการเปลี่ยนบัฟเฟอร์ของตัวอย่างโดยการกำจัดเกลือหรือสารละลายเดิมออกและแทนที่ด้วยบัฟเฟอร์ใหม่ Sephadex G25 ยังนิยมใช้ในขั้นตอนการเตรียมตัวอย่างก่อนการวิเคราะห์ขั้นสูง เช่น Mass Spectrometry หรือ Electrophoresis เพื่อให้ได้ผลลัพธ์ที่แม่นยำและเชื่อถือได้