โคลซาซิลลินโซเดียมซอลต์โมโนไฮเดรต ใช้หลักในการเป็นยาปฏิชีวนะเพื่อรักษาการติดเชื้อที่เกิดจากสแตฟฟิโลคอคคัสที่ผลิตเพนิซิลลิเนส มีประสิทธิภาพต่อการติดเชื้อแบคทีเรียหลายชนิด รวมถึงการติดเชื้อที่ผิวหนังและเนื้อเยื่ออ่อน การติดเชื้อในระบบทางเดินหายใจ และการติดเชื้อในกระดูกและข้อ ยานี้ทำงานโดยยับยั้งการสังเคราะห์ผนังเซลล์แบคทีเรีย นำไปสู่การทำลายแบคทีเรีย

ในสถานพยาบาล มักให้ทางปากหรือฉีด ขึ้นอยู่กับความรุนแรงและประเภทของการติดเชื้อ มีคุณค่าอย่างยิ่งในโรงพยาบาลที่ซึ่งเชื้อแบคทีเรียดื้อยาแพร่หลายมากขึ้น นอกจากนี้ ยังใช้ในสัตวแพทย์ศาสตร์เพื่อรักษาการติดเชื้อที่คล้ายกันในสัตว์

ยานี้ยังใช้ในการป้องกันการติดเชื้อเพื่อป้องกันการติดเชื้อในผู้ป่วยที่เข้ารับการผ่าตัด โดยเฉพาะอย่างยิ่งการผ่าตัดที่เกี่ยวข้องกับหัวใจหรือการฝังอุปกรณ์กระดูกและข้อ ความสามารถในการกำหนดเป้าหมายเชื้อแบคทีเรียดื้อยาทำให้เป็นส่วนประกอบสำคัญในการจัดการการติดเชื้อแบคทีเรียที่ซึ่งยาปฏิชีวนะอื่นๆ อาจล้มเหลว