โรดามีน บี ถูกนำมาใช้อย่างแพร่หลายในฐานะสีย้อมเรืองแสงในอุตสาหกรรมต่างๆ เนื่องจากมีสีชมพูแดงสดใสและการเรืองแสงสูง ในงานวิจัยทางชีววิทยา ใช้เป็นสารย้อมสีเพื่อแสดงภาพเซลล์และเนื้อเยื่อภายใต้กล้องจุลทรรศน์ ช่วยติดตามกระบวนการและโครงสร้างของเซลล์ นอกจากนี้ยังใช้ใน flow cytometry เพื่อติดฉลากและวิเคราะห์เซลล์ตามการเรืองแสง ในอุตสาหกรรมสิ่งทอ โรดามีน บี ใช้เป็นสีย้อมสำหรับผ้า ให้สีสันสดใส นอกจากนี้ยังใช้ในการผลิตหมึก สีทา และสารเคลือบเพื่อให้ได้เฉดสีเฉพาะ ในงานศึกษาสิ่งแวดล้อม ทำหน้าที่เป็นสารติดตามเพื่อตรวจสอบการไหลของน้ำและตรวจจับการรั่วไหลในระบบน้ำ การเรืองแสงทำให้มีคุณค่าในเทคโนโลยีเลเซอร์สำหรับเลเซอร์สีย้อม โดยใช้ผลิตคลื่นแสงความยาวคลื่นเฉพาะ อย่างไรก็ตาม เนื่องจากมีพิษที่อาจเกิดขึ้น การใช้ในอาหารและเครื่องสำอางจึงถูกควบคุมอย่างเข้มงวด