L-Proline p-nitroanilide trifluoroacetate salt ใช้เป็นสารตั้งต้นในงานวิจัยทางชีวเคมี โดยเฉพาะในการศึกษากิจกรรมของเอนไซม์ protease และ peptidase เป็นสาร chromogenic substrate ที่ช่วยตรวจจับและวัดปริมาณปฏิกิริยาเอนไซม์ผ่านการทดสอบ colorimetric เมื่อเอนไซม์ตัดตัดสารนี้ จะปล่อย p-nitroaniline ออกมา ซึ่งสามารถวัดได้ด้วย spectrophotometry เนื่องจากมี absorbance ชัดเจนในช่วงแสงที่มองเห็นได้ ทำให้เป็นเครื่องมือที่มีคุณค่าในการศึกษาจลนศาสตร์เอนไซม์ การคัดกรองสารยับยั้ง และการวิเคราะห์ความจำเพาะของเอนไซม์ proteolytic การประยุกต์ใช้ช่วยในการทำความเข้าใจกลไกเอนไซม์และพัฒนายารักษาโรคที่เกี่ยวข้องกับเอนไซม์